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| 免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(Westernblotting)，它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹具有SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。 凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA-electrophoretic mobility shift assay）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA 结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术zui初用于研究DNA 结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA 序列的相互作用。
WB实验代测，Western Blot技术服务，免疫印迹代测 WB实验代测，Western Blot技术服务，免疫印迹代测
2)选择合适的蛋白酶抑制剂，避免蛋白降解，从而保证检测的准确性！ 2 、蛋白定量 常用的蛋白定量方法：Bradford assay, Lowry assay 或BCA assay。定量后，可根据情况将标本保存在-20°C /-80°C备用，进行免疫沉淀（IP）或者直接进行电泳分离蛋白 3 、电泳分离蛋白质 根据待测蛋白状态确定电泳条件：
根据不同的检测目的和待测蛋白的特性,选择合适的膜类型。常用的转移膜类型有:PVDF膜、硝酸纤维素膜（NC膜）和尼龙膜，其中PVDF和NC膜的使用频率zui高。各种膜的技术参数及比较如下：
去掉膜上多余的非特异性结合位点，降低背景。常用的封闭溶液有：含BSA或者脱脂奶粉的TBST或TBS 6 、一抗孵育 一抗的选择成功与否，是整个WB实验成功的关键：选择一抗有以下几个注意点： 选择适合检测标本种属的一抗（说明书有验证） 选择适用于WB实验方法的一抗（说明书有验证） 选择单克隆抗体或者经过亲和纯化的多克隆抗体 一抗的保存和使用： 根据说明书的要求条件进行抗体的保存；一般需要将抗体分装后放入-20度保存，避免反复冻融。 抗体的工作液现配现用，在4度保存不要超过2周 根据说明书推荐浓度使用TBST稀释一抗。由于实验室条件和检测方法等的差异，说明书推荐的稀释比例只作参考，需要在说明书推荐的浓度周边进行多个浓度梯度的实验检测，然后选择信噪比的抗体浓度进行实验。如果说明书没有推荐浓度，可进行多个稀释比例进行摸索*稀释度（1:100-1:3000）。 孵育条件：推荐4°C孵育过夜（一般大于18个小时），根据抗体亲和力不同孵育时间有所区别 内参的选择和使用：WB 过程监测以及目的蛋白定量的标准！ WB常用内参及其技术参数：
7 、二抗孵育 根据说明书推荐浓度使用TBST稀释一抗。如果说明书没有推荐浓度，可进行多个稀释比例进行摸索*稀释度（1:1000-1:20000）。孵育条件一般为室温1-2小时 8 、底物孵育 选择显色或者化学发光底物。一般倾向于化学发光，灵敏度高且背景低，节省抗体用量 9 、结果分析和检测 凝胶成像系统检测或者暗室曝光到胶片 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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